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化學(xué)發(fā)光免疫分析中常用化學(xué)發(fā)光劑介紹化學(xué)發(fā)光免疫測定(CLIA),是用化學(xué)發(fā)光劑直接標記抗原或抗體的一類(lèi)免疫測定方法。吖啶酯是較為理想的發(fā)光底物,在堿性環(huán)境中即可被過(guò)氧化氫氧化而發(fā)光。它是目前發(fā)展和推廣應用最快的免疫分析方法,也是目前最先進(jìn)的標記免疫測定技術(shù),靈敏度和精確度比酶免法、熒光法高幾個(gè)數量級,可以完全替代放射免疫分析、徹底淘汰酶聯(lián)免疫分析。主要具有靈敏度高、特異性強、試劑價(jià)格低廉、試劑穩定且有效期(6-18個(gè)月)、方法穩定快速、檢測范圍寬、操作簡(jiǎn)單自動(dòng)化程度高等優(yōu)點(diǎn)。
用作標記的化學(xué)發(fā)光劑應符合條件:
1、能參與化學(xué)發(fā)光反應。
2、與抗原或抗體偶聯(lián)后能形成穩定的結合物試劑。
3、偶聯(lián)后仍保留高的量子效應和反應動(dòng)力。
4、應不改變或極少改變被標記物的理化特性,特別是免疫活性。
魯米諾類(lèi)和吖啶酯類(lèi)發(fā)光劑等均是常用的標記發(fā)光劑!
化學(xué)發(fā)光免疫分析中所使用的標志物分類(lèi)
(一)直接化學(xué)發(fā)光劑 直接用化學(xué)發(fā)光劑標記抗原或抗體。
吖啶酯是目前常用的直接標記發(fā)光劑。
1、吖啶酯 在堿性條件下被H2O2氧化時(shí),發(fā)出波長(cháng)為470nm的光,具有很高的發(fā)光效率,其激發(fā)態(tài)產(chǎn)物N-甲基吖啶酮是該發(fā)光反應體系的發(fā)光體。吖啶酯類(lèi)發(fā)光劑可直接用于標記半抗原和蛋白質(zhì)等。用于標記抗體時(shí),結合穩定,結合后并不減少光量子的產(chǎn)生,可獲得高的比活性,有利于雙位點(diǎn)化學(xué)發(fā)光免疫分析的建立。
2、三聯(lián)吡啶釕 三聯(lián)吡啶釕是電化學(xué)發(fā)光劑,它和電子供體三丙胺(TPA)在陽(yáng)電極表面可同時(shí)失去一個(gè)電子而發(fā)生氧化反應!
(二)酶促反應發(fā)光劑 利用標記酶(辣根過(guò)氧化物酶和堿性磷酸酶)的催化作用,使發(fā)光劑(底物)發(fā)光。
辣根過(guò)氧化物酶催化的發(fā)光劑為魯米諾及其衍生物;堿性磷酸酶催化的發(fā)光底物為AMPPD。
1、魯米諾及其衍生物 魯米諾、異魯米諾及其衍生物都有化學(xué)發(fā)光特性。魯米諾是最早合成的發(fā)光物質(zhì)。
2、AMPPD 是一種新的化學(xué)發(fā)光劑,其分子結構中有兩個(gè)重要部分,一個(gè)是連接苯環(huán)和金剛烷的二氧四節環(huán),它可以斷裂并發(fā)射光子;另一個(gè)是磷酸基團,它維持著(zhù)整個(gè)分子結構的穩定。 下一篇體外診斷試劑入院流程 |